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PCR實驗室功能設備及裝修注意事項

11.02.2021
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PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū),樣品制備區(qū),擴增區(qū)和擴增產物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域,并設有專用走廊,各工作區(qū)域應設緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的,各工作區(qū)有明顯的標志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴增前區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū),即從:試劑準備區(qū)——樣品制備區(qū)——PCR擴增室——產物分析室,不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)頂部應該安裝紫外燈,紫外燈波長為254mm,每20㎡一支40W的紫外燈。

  
一、實驗室各區(qū)功能及主要設備

1. 試劑準備區(qū):主要進行試劑的制備,分裝和主反應混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內,并在本區(qū)內制備成所需的試劑。本區(qū)主要設備有天平,冰箱,離心機,加樣器,振蕩器等。對于氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴格的要求,一般為+10Pa。

2. 樣品制備區(qū):主要進行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設備有冰箱,生物安全柜,離心機,加樣器,振蕩器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染,一般為+10Pa。

3. 擴增區(qū):主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板(來自樣品制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行。本區(qū)主要設備有:擴增儀,冰箱,離心機,加樣器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶從本區(qū)漏出一般為-25Pa。

4. 擴增產物分析區(qū):擴增產物的測定。本區(qū)主要設備有酶標儀,洗板機.加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,一般為-25Pa,以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域



二、PCR實驗室通風系統(tǒng)及壓力控制


各區(qū)域之間應具備單間的實驗工藝流,物流,人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗室之間的相互干擾,防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。

PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴格控制送,排風的比例以保證個實驗區(qū)的壓力要求。

三、PCR實驗室裝飾

實驗室圍護結構應牢固,氣密性好;所有陰陽角宜采用圓弧過度;墻體內壁光潔,不積塵,耐腐蝕,易清洗消毒;地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪,材料應滿足無縫隙,無滲漏,光潔,耐腐蝕的要求。

四、PCR實驗室注意事項

1.幾個區(qū)域的大小設置情況,試劑準備區(qū),擴增區(qū),擴增產物分析區(qū),空間可以相對小一些,樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應大一些。

2.試劑準備區(qū),樣品制備區(qū)設緊急洗眼器,以保證操作人員的安全。
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